显微镜发展至这一阶段，是光学技术的快速发展时期，尤其是可控的电灯取代自然光使得显微镜的使用不再受自然环境以及地理位置的影响。另外由于电灯的多样化，以及各种滤光镜的运用，光学技术的进步，促使荧光显微镜、金相显微镜、偏光显微镜，倒置显微镜等多种类型显微镜得以面世。三目生物显微镜（显微镜发展的第三阶段3.0）光学成像效果取得重大进展之后，人们将显微镜---的重点放在了显微图像的获取技术上。人们在双目光路信号进行再次分光，形成三目观察筒，然后将---安装于三目观察筒上以获得显微图像。此后显微影像逐渐成为人们记录原始信息的重要手段。相比之前提及的显微绘画，这种获取显微画面的方式更---、更，更---。
半个世纪过去了，荷兰再次诞生了一位显微镜伟人。1632年10月24日，安东尼·范·列文虎克（antonie van leeuwenhoek）出生在荷兰的代尔夫，徕卡材料显微镜供销，由于家境困难，他只上过很短时间的学，16岁就被送去荷兰首都阿姆斯特丹做布店学徒。1654年，22岁的列文虎克回到老家代尔夫，开了一家属于自己的小布店。一开始，他尝试着用凸透镜来放大鉴定布料的，布料店的工作并不忙碌，他很快培养起了对透镜的兴趣，并尝试自己打磨镜片。靠着兴趣和毅力，徕卡材料显微镜代理，这个没上过几年学的年轻人在自家的小店里打磨制造出了第的镜片，它们的厚度仅为1毫米，曲率半径为0.75毫米，有着---的放大率和分辨率。
在掌握了镜片的磨制技术后，列文虎克将镜片组装成复式显微镜，徕卡材料显微镜，并用它们发现了人类---见到的细胞。典型的列文虎克显微镜很小，结构很巧妙，由一块扁平宽大的镜身、一个镜头、一个针形载物台、两个螺钉构成的。透镜被镶嵌在两块凿出小孔的黄铜片之间，螺钉可以用于调节标本与透镜之间的距离，以调整焦距。使用时，徕卡材料显微镜，先将标本固定在针尖上，拿起显微镜对准光源，调节螺钉令影像达到状态便---察。
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